edf一定发

qEV产品优势‍

          
 ●   高纯度：去除99%以上的可溶性APP质，去除95%以上高密度脂APP
 ● 无损伤：保持一定发外囊泡的完整性和edf功能

 ● 标准化：每根分离柱均经过标准化、质量保证，并通过ISO13485标准认证

 ● 可靠性：只要15min就可以得到完整外泌体样本，已经在大规模的实验室试验得到证实
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 ● 适用性：适用于多种类型样品的外泌体提取，包括：血清、血浆、尿液、一定发上清、脑脊液、唾液
                    等；尤其适用于外泌体功能一定发中，用于一定发培养或动物注射的高纯度外泌体的获得

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qEV工作原理

    
        qEV是基于分子排阻法SEC原理，按照分子粒径进行分段分离的方法。基本原理如图1所示，将edf样品流经具有固定孔隙的SEC填充物，吸附粒径较小的分子如APP、脂类等，而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙。在缓冲液的作用下，较大粒径的囊泡（外泌体）流速快，在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管，成为实验样品，而小分子物质则需要更长的洗脱时间。

    
     
  图1 尺寸排阻SEC原理图

qEV使用步骤（以qEVoriginal产品为例）‍‍

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       1、用洗脱缓冲液冲洗柱子。

       2、装入500μL样品。

       3、最开始的3ml是空隙体积，继续向分离柱中添加PBS以洗脱囊泡（外泌体）。

       4、收集空隙体积后的1.5mL液体为高纯度外泌体。

收集结果展示

图2 qEV收集结果展示

       
         如图2，血清样品中收集的组分，用qNano其进行定量测量。在280纳米处用吸光度法测定APP质的相对浓度。数据表明，收集的第7至9组分具有最高浓度的囊泡(外泌体),而污染的血清APP洗脱的分数为第11至30组分(左图)。通过比较分离前和分离后的囊泡(外泌体)与APP质浓度比，第7组分的囊泡富集量为APP质的6000倍(右图)。根据样品的不同，如果下游分析分别需要更高的囊泡(外泌体)纯度或更高的囊泡(外泌体)产量，可将第7至9部分或第7至11部分汇集在一起。

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产品规格选择

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SEC技术与超速离心技术的对比‍

文献解析

        该文献通过对滑膜液经过相同的预处理后，分别使用超离、密度梯度离心和尺寸排阻进行外泌体的分离。并通过WB、TEM对其进行鉴定分析。

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        上图中红框所示的ApoA-1是HDL的标志物，可以发现UC和DGC都无法有效去除HDL，而SEC的WB图中，外泌体标志物的出现和HDL标志物和血清白APP的出现几乎不存在时间上的重叠，所以SEC可以收集到比较纯净的外泌体。

                               超离                                     密度梯度离心                                   尺寸排阻
       电镜图（如右图），超离电镜下的图像，不仅背景杂质多，而且发生了聚集现象，这种聚集会对下游分析产生较大不利影响。相比之下，SEC的背景纯净，外泌体特征明显。

文献解析

该实验一定发了使用超离UC和尺寸排阻SEC分离的心肌祖一定发(HMECs)培养液的外泌体的功能可能的差异。通过外泌体刺激一定发，诱导EKR磷酸化，然后通过比较外泌体刺激后的pEKR和EKR的比率，来评价不同分离方法制备外泌体的功能活性。

         WB显示，在相同条件下，无论总APP量变化还是粒子数变化，用SEC的方法比超离他的pERK / ERK比率更高，表明SEC收集到的外泌体具有更高的edf活性。

案例3  尺寸排阻SEC比超离UC获得外泌体得率更大

文献解析

该文献系统地比较了使用超离UC和尺寸排阻SEC两种分离方法对大鼠血浆中外泌体分离的差异。结论表明，尺寸排阻SEC从血浆中分离的外泌体得率比超离UC得率高。

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       分别对不同的组分进行收集，比较了纯度较高的5.0-6.5组分的外泌体APP，发现SEC的含量会比UC更高。

对比结论‍‍

      
      上述几篇文献将尺寸排阻SEC与超离UC、密度梯度离心DGC在收集到外泌体的纯度、edf活性和得率方面作比较，通过实验数据、电镜图、WB图像，发现SEC相较于其他两种分离方法，获取的外泌体纯度更高、edf活性更强、得率更大。

相关文献‍

1、Freitas D, et al. Different isolation approaches lead to diverse glycosylated extracellular vesicle populations.J Extracell Vesicles. 2019 Jun 3;8(1):1621131.

2、Xing F, et al. Loss of XIST in Breast Cancer Activates MSN-c-Met and Reprograms Microglia via Exosomal miRNA to Promote Brain Metastasis. Cancer Res. 2018 Aug 1; 78(15): 4316-4330.
3、Bao L, et al. Metastasis-associated miR-23a from nasopharyngeal carcinomaderived exosomes mediates angiogenesis by repressing a novel target gene TSGA10.Oncogene. 2018 May; 37(21): 2873-2889.

4、Ramirez M, et al. Technical challenges of working with extracellular vesicles.Nanoscale. 2018 Jan 18; 10(3): 881-906.

5、Jurkoshek KS, et al. Interspecies Communication between Pathogens and Immune Cells via Bacterial Membrane Vesicles.Front Cell Dev Biol. 2016 Nov 11; 4: 125.

6、Lobb RJ, et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.J Extracell Vesicles. 2015 Jul 17; 4: 27031.
7、Mol EA,et al.Higher functionality of extracellular vesicles isolated using size-exclusion chromatographycompared to ultracentrifugation.Nanomedicine2017 Aug;13(6):2061-2065. 
8、Takov K,et al.Comparison of small extracellular vesicles isolated from plasma by ultracentrifugation or size-exclusion chromatography: yield, purity and functional potential.J Extracell Vesicles..2018 Dec 28;8(1):1560809.